Apabila menggunakan peptida, kita sering menemui penunjuk ketulenan peptida dan kandungan peptida. Ramai orang mungkin tertanya-tanya mengapa ketulenan peptida mereka adalah 95% tetapi kandungan peptida hanya 80%. Ini kerana ini adalah dua konsep yang sama sekali berbeza.
Ketulenan Peptida: Ketulenan peptida merujuk kepada jumlah peptida sasaran yang dikesan pada 214 nm (214 nm ialah panjang gelombang penyerapan rantai peptida) menggunakan analisis HPLC.
Kandungan Peptida: Ini merujuk kepada peratusan peptida berbanding bahan bukan-peptida dalam sampel.
Ketulenan peptida merujuk kepada kandungan peptida sasaran yang dikesan oleh HPLC pada 214 nm (214 nm ialah panjang gelombang penyerapan rantai peptida). Selain peptida sasaran, HPLC boleh mengesan kekotoran termasuk: jujukan yang dipadam (jujukan sasaran kehilangan satu atau lebih sisa asid amino), jujukan terpotong (jujukan yang dihasilkan semasa perlindungan), dan jujukan yang tidak dilindungi sepenuhnya (mengakibatkan proses sintesis atau proses pembelahan akhir). Walau bagaimanapun, HPLC tidak dapat mengesan air dan garam sisa seperti trifluoroacetate (TFA) dan asetat. Semasa sintesis peptida, urutan peptida dibelah daripada resin menggunakan TFA, dan sejumlah kecil TFA juga dihasilkan semasa penulenan. Oleh itu, terminal amino bebas dan rantai sampingan lain peptida, seperti Arg, Lys, dan His, boleh menjana sejumlah kecil kekotoran TFA. Isu lain ialah kelembapan. Peptida biasanya dehidrasi menggunakan lyophilization, tetapi walaupun begitu, air akan wujud pada tahap yang berbeza-beza bergantung kepada kapasiti pengikatan kovalen. Oleh itu, peptida yang dihantar biasanya mengandungi garam TFA dan jumlah surih air, yang tidak dapat dikesan oleh HPLC, sekali gus membawa kepada perbezaan kandungan dan ketulenan peptida.
